После окончания вуза по распределению поступила работать инженером-экономистом на Днепропетровский машиностроительный завод им.Ленина. В 1988-м с супругом начинает бизнес-карьеру: открыли сеть видео-салонов. С 1989 по 1991 гг. занимает пост коммерческого директора Днепропетровского молодежного центра "Терминал".
С 1991 года Тимошенко - гендиректор корпорации "Украинский бензин" (КУБ), которая занимается торговлей горюче-смазочными материалами. В 1995-м становится президентом корпорации "Единые энергетические системы Украины" (ЕЭСУ), созданной на базе КУБа. Компания зарабатывает деньги на бартерных сделках - сбывает продукцию украинских предприятий (преимущественно в Россию) в обмен на энергоресурсы. В конце 1996 года у корпорации с многомиллионным капиталооборотом начинаются "политические" и, как следствие, финансовые трудности. Тимошенко решает идти в политику.
В январе 1997-го беспартийный гендиректор ЕЭСУ впервые занимает пост народного депутата Украины, выиграв промежуточные выборы в мажоритарном округе в Кировоградской области. Недруги ставят Тимошенко в претензию как деловое, так и политическое сотрудничество с одиозным персонажем украинской политики Павлом Лазаренко. По официальной версии конца 1990-х, именно благодаря протекции со стороны теперь уже бывшего губернатора Днепропетровской области и премьер-министра ЕЭСУ достигла своего финансового расцвета. Политическая же связь оказалась очевидней. В сентябре 1997-го Лазаренко возглавил Всеукраинское объединение "Громада". Первым замом лидера партии стала Тимошенко.
В 1998-м Тимошенко во второй раз избирается народным депутатом. В декабре 1999-го становится лидером Всеукраинского объединения "Батькивщина". И практически сразу из Верховной Рады уходит на пост вице-премьера по вопросам ТЭК в правительство Виктора Ющенко. Ее деятельность не устраивает многих крупных политиков и бизнесменов. Тимошенко попадает в опалу. В августе 2000 года арестовывают ее супруга - одного из руководителей ЕЭСУ. 15 января 2001-го Генпрокуратура предъявляет куратору ТЭК обвинения в контрабанде и служебном подлоге. Еще через четыре дня Тимошенко отправляют в отставку. 13 февраля ее арестовывают, в камере СИЗО она проводит больше месяца.
В этот сложный период Тимошенко всецело уходит в политическую борьбу - против режима Леонида Кучмы и за свое место во власти. Становится лидером Форума национального спасения, который состоял из нескольких оппозиционных партий и вскоре переименовался в Блок Юлии Тимошенко. Во главе БЮТ в марте 2002-го Тимошенко в третий раз получает мандат народного депутата. В сентябре того же года становится одним из лидеров акции "Украина без Кучмы".
В 2004 году БЮТ и блок "Наша Украина" создают коалицию "Сила народа" для поддержки кандидатуры Ющенко на выборах президента Украины. В ноябре-декабре того же года Тимошенко принимает активнейшее участие в "оранжевой революции", чем поднимает свою и без того высокую популярность среди населения еще выше.
После победы оппозиционного кандидата в феврале 2005-го возглавляет первое "оранжевое правительство". Через семь месяцев лишается поста премьер-министра. Одна из основных причин - напряженные отношения с людьми из близкого окружения президента. Одновременно с отставкой Тимошенко получает звание "Человек года Центрально-Восточной Европы" на Экономическом форуме в Кринице Гурской (Польша).
В марте 2006-го БЮТ на выборах в Верховную Раду получил 129 депутатских мандатов из 450 (второе место после Партии регионов). Тимошенко (член комитета по вопросам правовой политики) рассчитывала на создание демократического ("оранжевого") большинства в парламенте и повторного обретения поста премьер-министра. Однако переговоры БЮТ с "Нашей Украиной" и СПУ зашли в тупик, коалиция этих сил не состоялась. Тимошенко практически сразу стала формальным и неформальным лидером парламентской оппозиции. Едва ли не с самого начала работы Верховной Рады V созыва заявила о необходимости провести досрочные выборы, поскольку переход социалистов в коалицию с "регионалами" и коммунистами обманул ожидания большей части избирателей. Неслучайно весной 2007 года Тимошенко активно поддержала инициативу Ющенко по досрочному роспуску парламента.
30 сентября 2007-го на досрочных выборах Блок Юлии Тимошенко превзошел результат 2006 года, взяв 156 мандатов (на 27 больше). 29 ноября БЮТ и пропрезидентский блок "Наша Украина - Народная самооборона" (несмотря на противодействие нескольких его членов), как и обещали избирателям, заключили соглашение о создании демократической коалиции. После чего было принято решение о выдвижении на пост спикера парламента "нунсовца" Арсения Яценюка, а на пост премьера - Тимошенко. При голосовании за кандидатуру Тимошенко со второй попытки был набран необходимый минимум в 226 голосов.
В 2010 году Юлия Тимошенко баллотировалась на пост президента Украины. По итогам второго тура голосования она проиграла своему визави Виктору Януковичу с разрывом в 3,48%. После выборов в Верховной Раде была создана новая коалиция и Тимошенко лишилась поста премьер-министра.
Вскоре против Тимошенко были открыты несколько уголовных дел – всего же, начиная с 1995 года и по сегодняшний день, в отношении экс-премьера Юлии Тимошенко было возбуждено 24 уголовных дела. За подписание газовых контрактов, об убийстве Евгения Щербаня, контрабанде валюты, коррупции при подписании Киотского протокола, хищении средств ЕЭСУ и много др. В 2011 году Тимошенко получила 7 лет тюрьмы за превышение полномочий при подписании газовых контрактов с РФ. На свободу вышла лишь после свержения режима Виктора Януковича в феврале 2014 года.
Сразу же заявила о намерении вернуться во власть.